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曲霉屬通用探針法熒光定量PCR試劑盒試劑準備
點擊次數:992 更新時間:2020-07-23

曲霉屬通用探針法熒光定量PCR試劑盒試劑準備

. DNA模板

2.對應目的基因的特異引物(在PCR反應中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續按照模板DNA復制,而不能從無到有,憑空合成。這一小段序列就是你所要有設計的引物。可以是DNA也可以是RNA,一般20多bp,需要根據你的模板鏈設計。因此,擴增不同的基因需要設計不同的引物)

3.0×PCR Buffer

4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM

5.Taq酶操作步驟 

.在冰浴中,按以下次序將各成分加入一無菌0.5ml離心管中。

      0×PCR buffer             5μl

      dNTP mixl                 4μl

       引物(0pM)               2μl

       引物2(0PM)              2μl

       Taq酶(2U/μl)            μl

      DNA模板(50ng-μg/μl) μl

      加ddH2O至               50 μl

    視PCR儀有無熱蓋,不加或添加石蠟油。

2.調整好反應程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執行擴增。一般:在93℃預變性3-5min,進入循環擴增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環30-35次,zui后在72℃ 保溫7min。

3.結束反應,PCR產物放置于4℃待電泳檢測或-20℃保存。

4.PCR的電泳檢測:如在反應管中加有石蠟油,需用00μlLuFang進行抽提反應混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-0μl電泳檢測。

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