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RNA酶保護(hù)試驗(yàn)方法分析
點(diǎn)擊次數(shù):790 更新時(shí)間:2017-04-01

PⅢNP Elisa試劑盒RNA酶保護(hù)法是近十年發(fā)展起來(lái)的一種全新的mRNA定量分析方法。其基本原理是將標(biāo)記的特異RNA探針(32P或)與待測(cè)的RNA樣品液相雜交,標(biāo)記的特異RNA探針按堿基互補(bǔ)的原則與目的基因特異性結(jié)合,形成雙鏈RNA;未結(jié)合的單鏈RNA經(jīng)RNA酶A或RNA酶T消化形成寡核糖核酸,而待測(cè)目的基因與特異RNA探針結(jié)合后形成雙鏈RNA,免受RNA酶的消化,故該方法命名為RNA酶保護(hù)實(shí)驗(yàn)。

與Northern blot和RT-PCR比較,RPA有以下幾個(gè)優(yōu)點(diǎn):

. 檢測(cè)靈敏度比Northern雜交高。由于Northern雜交步驟中轉(zhuǎn)膜和洗膜都將造成樣品和探針的損失,使靈敏度下降,而RPA將所有雜交體系進(jìn)行電泳,故損失小,PⅢNP Elisa試劑盒提高了靈敏度。

2. 由于PCR擴(kuò)增過(guò)程中效率不均一和反應(yīng)“平臺(tái)”問(wèn)題,基于PCR產(chǎn)物量進(jìn)行分析所得數(shù)據(jù)的可靠性將下降,而RPA沒(méi)有擴(kuò)增過(guò)程,因此,分析的數(shù)據(jù)真實(shí)性較高。

3.由于與反義RNA探針雜交的樣品RNA僅為該RNA分子的部分片段,因此,部分降解的RNA樣品仍可進(jìn)行分析。

4.步驟較少,耗時(shí)短。與Northern雜交相比,省去了轉(zhuǎn)膜和洗膜的過(guò)程。

5. RNA-RNA雜交體穩(wěn)定性高,無(wú)探針自身復(fù)性問(wèn)題,無(wú)須封閉。

6. 一個(gè)雜交體系中可同時(shí)進(jìn)行多個(gè)探針雜交,無(wú)競(jìng)爭(zhēng)性問(wèn)題。

7. PⅢNP Elisa試劑盒檢測(cè)分子長(zhǎng)度可以任意設(shè)置,靈活性大。RPA的缺點(diǎn)是需要同位素標(biāo)記探針。

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